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西班牙薩拉戈薩大學(xué)科學(xué)家首次采用BE-Gradient微流控芯片觀測多球細胞的化學(xué)遷移情況，主要研究了OSC-19多球細胞（OSC-19：人舌鱗癌細胞）在FBS（胎牛血清）的趨化反應(yīng)。探究方向如下：1、通過橫向微通道探究不同化合梯度條件下的趨動行為。2、對比OSC-19多細胞在微流控系統(tǒng)（膠原包被）和在孔板中的球狀體遷移情況。3、證明了在對趨化梯度的反應(yīng)中OSC-19單細胞培養(yǎng)時與多細胞球體培養(yǎng)時表現(xiàn)出不同的響應(yīng)機制。

前言：

趨化運動是指細胞能夠感受到外界化學(xué)物質(zhì)的濃度梯度，并沿著濃度梯度的方向所做的定向運動。趨化作用在許多病癥中起著關(guān)鍵作用，包括炎癥和自身免疫性疾病以及癌癥，還有許多發(fā)育和組織重塑過程，包括胚胎生長和傷口愈合。因此，能夠詳細研究趨化過程的技術(shù)是藥物發(fā)現(xiàn)和基礎(chǔ)生物學(xué)的重要工具。

瓶頸挑戰(zhàn)：

許多不同的方案被用來研究細胞遷移和趨化作用。Boyden Chamber Assay：Boyden小室法是目前細胞遷移和侵襲實驗技術(shù)最常用的方法之一。雖然這種方法用途廣泛，但它有一些局限性：例如，它不能直接觀察遷移過程中的細胞。除此之外，還有一些研究細胞遷移和趨化作用其他物質(zhì)或方法，包括under-agarose凝膠、Agarose Spot、Zigmond chamber、Dunn chamber和Insall chamber檢測等。這些檢測方法各有其優(yōu)點，但它們通常都不能研究隨著時間變化的化學(xué)梯度對細胞的影響。此外，梯度控制和重現(xiàn)性可能是一個挑戰(zhàn)。這些缺點都可以通過使用微流控系統(tǒng)來克服，微流控系統(tǒng)已經(jīng)成為研究趨化性的有力工具。

雖然現(xiàn)有技術(shù)觀察單細胞的趨化反應(yīng)裝置是非常有效，例如Jeon NL的預(yù)混器梯度發(fā)生器，但它們在某種程度上與更現(xiàn)實的細胞遷移情況有距離。細胞是多細胞系統(tǒng)的一部分，往往多細胞的趨化反應(yīng)與單細胞展現(xiàn)不一樣的遷移機制。研究表明，固體腫瘤細胞可表現(xiàn)出與單個細胞不同的機制進行遷移和入侵。例如，膠質(zhì)瘤為可孤立的侵襲性腫瘤，而上皮細胞似乎是通過集體運動侵襲。

這就跟現(xiàn)實情況造成了一定的差異。更重要的是，現(xiàn)有技術(shù)往往都不允許對多細胞的集體遷移，這是一塊研究的空白。

解決方案：

同時，本文采用BE-Gradient微流控芯片作為核心裝置進行研究。該裝置由一個中央室（模擬細胞培養(yǎng)）和兩條包含3個通向中心室的橫向通道（模擬血管）組成。在中心室容納包含細胞的水凝膠，兩側(cè)通過灌注不同濃度的介質(zhì)，通過水凝膠多孔結(jié)構(gòu)對流體的阻力作用，在橫向微通道形成不同的濃度梯度。

圖1 BE-Gradient微流控芯片內(nèi)部結(jié)構(gòu)和參數(shù)示意圖

圖2 BE-Gradient微流控芯片產(chǎn)品和實驗示意圖

BE-Gradient微流控芯片的熒光成像和顯微成像表現(xiàn)：

圖3 在FBS化學(xué)梯度下OSC-19多細胞的顯微形貌圖

圖4 在FBS化學(xué)梯度下OSC-19多細胞的熒光成像圖

圖5（a）OSC-19單細胞的顯微圖（b）OSC-19單細胞的趨化運動分析（c）OSC-19單細胞的熒光成像圖

注：本文圖片部分摘引于文獻：Ayuso J M , Ba Sheer H A , Rosa M , et al. Study of the Chemotactic Response of Multicellular Spheroids in a Microfluidic Device[J]. Plos One, 2015, 10(10):e0139515.

其他應(yīng)用：

• 3D細胞培養(yǎng)：首先將細胞混合在液相水凝膠中，然后將它們引流至中央室中。水凝膠聚合完成后，通過橫向通道灌注具有不同濃度化合物的培養(yǎng)基，并實時監(jiān)測效果。

• 2D細胞培養(yǎng)：適用于貼壁細胞，不僅可以在中央室中檢測，也可以在橫向通道中培養(yǎng)。

應(yīng)用案例：細胞/球狀體入侵和遷移、血管新生、轉(zhuǎn)移、血管生成、趨化、缺血、細胞分化或氧化壓力、微型器件內(nèi)的壞死核心生成、葡萄糖梯度實驗。

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