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神經細胞膜電位變化的熒光成像

jf_64961214 ? 來源:jf_64961214 ? 作者:jf_64961214 ? 2023-07-07 06:48 ? 次閱讀

wKgaomSnRNWAVMtzAADknoBLQ-w514.png

所用相機:

wKgZomSnRNWAZDcoAABdfRLvKpk876.jpg

ORCA-Flash4.0 V3(C13440-20CU)

成像方法:

寬場熒光

應用描述:

電壓敏感的熒光蛋白定位于細胞膜上,與離子通道相偶聯。神經細胞的膜電位變化會引起該蛋白熒光強弱的變化,從而使膜電位“可視化”。傳統的CCD或普通高速CMOS相機由于靈敏度和幀速上限太低,往往和肉眼觀察一樣,分辨不出熒光信號的快速變化;該實驗使用濱松Flash4.0 V3,在USB 3.0的連接方式下將幀速提高至1,0000 fps,使1 ms內的熒光變化也能夠清晰的呈現出來。

# 詳細描述

該實驗使用胚胎期電轉質粒的方式,讓小鼠腦部特定類群的神經元表達電壓敏感的熒光蛋白ASAP1,配合膜片鉗系統對腦片中被標記的神經元給予電刺激,使其膜電位產生變化;同時利用Flash4.0 V3的超高速成像能力,捕捉熒光信號的實時變化。

1. 在512*128的ROI(region of interst)下,可以用1600 fps的幀速記錄單個神經細胞胞體的膜電位變化。

wKgaomSnRNWADZwaAABz1V6skO0335.png

wKgZomSnRNWAUV8iAABRLe6E5ak075.jpg

2. 在512*8的ROI下,其幀速可以達到10000 fps。在該尺度下可以達到每個電位的Spike記錄5-10個采樣數據點,且其信號的信噪比仍然很好。

wKgaomSnRNWAQS1UAAC4S5g_l4g178.png

3. 成像系統配置:Olympus BX51WI + Hamamatsu Flash4.0 V3

wKgZomSnRNaACfMnAAEkGHaYSYY211.jpg



審核編輯 黃宇

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