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電子發燒友網>電子資料下載>醫療電子>GUIDE-seq和Digenome-seq等全基因組CRISPR 檢測的關鍵技術介紹

GUIDE-seq和Digenome-seq等全基因組CRISPR 檢測的關鍵技術介紹

2017-09-24 | rar | 0.17 MB | 次下載 | 免費

資料介紹

  在 2013 年,來自麻省總醫院的研究人員發現使用 CRISPR-Cas RNA 引導性核酸酶的一個重要局限:會在預期靶點以外的位點上生成多余的 DNA 突變。此后陸續有研究直接說明了 CRISPR/Cas9 存在嚴重的脫靶性,即該技術可以發生非特異性切割,引起基因組非靶向位點的突變,這樣會造成研究結果的不確定性以及研究工作的大量增加,這一問題嚴重地限制了 Cas9 的應用。

  

  因此科學家們希望能通過全基因組檢測脫靶剪切,近年來研發了不少檢測脫靶剪切酶活性的實驗方法,比如近期 Nature Methods 報道的兩項技術,這些技術是什么,具有何種優勢,具體讓我們來看看:

  GUIDE-seq 以往人們在檢測 CRISPR-Cas 核酸酶誘導的脫靶 DNA 斷裂時,往往事先假定脫靶位點與靶標位點相似。GUIDE-seq 是首個不需要這樣做的方法,而且它相當靈敏 。一組研究人員利用一種短雙鏈寡核苷酸來標記 CRISPR-Cas 誘導的脫靶斷裂,測序這些標簽所在的基因組區域,就能夠確定脫靶突變的位置。研究表明,就算某個脫靶突變的出現頻率低至 0.1%,GUIDE-seq 也能夠檢測得到。由于許多脫靶突變發生在與目標位點差異很大的地方,因此脫靶 DSB 的數量和位置是很難預測的。

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